越来越多细胞培养物用于药物的研发和生产，建立开发的细胞系众多，每一个细胞系都是独特的，必须通过保存细胞系来保证后续研究和生产的需要。
为使细胞在复苏时存活率最高，除了复苏条件的控制和操作的规范，最佳的冻存条件和细胞状态也非常重要。
最佳的冷冻条件可以最大化降低细胞内晶体形成，减少细胞内谁凝固所形成的高浓度溶质对细胞造成的低温损伤，通常要经过缓慢冷冻，同时用亲水的低温保护剂排除水分，并在尽可能低的温度下保存细胞，降低高浓度盐对冰中蛋白质变性的影响。最终可以通过快速复苏减少细胞内晶体的形成以及细胞内残余冰晶溶解时对细胞的损伤，实现细胞活性和状态的最佳保持。
细胞冷冻曲线（动物细胞培养——基本技术指南（第五版））
> 材料和设备
无菌冻存管/盒，无菌冻存液，离心机，冰箱、液氮罐
操作步骤：
1.培养瓶中生长至对数生长末期的细胞（若为贴壁细胞用胰蛋白酶消化），取少量进行细胞计数。
2.离心收集细胞，将细胞悬浮至 2 x 106-2 x 107 个细胞 /mL
3.配制冻存液，将细胞保护剂（如二甲基亚砜（DMSO），10%-20%）加入到生长培养基中
4.用配好的冻存液将细胞悬液 1：1 比例稀释至细胞浓度 1 x 106-1 x 107 个细胞 /mL。
5.将细胞悬浮液分装至预先标记好的冻存管中，密封。
6.将冻存管以 1℃/min 的速率进行冷冻，或通过 -20 ℃（30min）、-40 ℃（2hr）、-80 ℃冰箱（过夜或 2 天）的方式进行程序降温。
7.当冻存管温度达到 -70℃ 或更低时，转移到液氮罐中存放。
>冻存管从室温 20℃ 下降到 -70℃ 需要 4-6 小时，所以冻存管在 -70℃ 冰箱过夜更有利于保证细胞的 -70℃ 低温。
>将冻存管转移到液氮罐中时必须迅速，否则冻存管会以10℃/min 的速度升温，温度升至超过 -50℃ 细胞状态会迅速恶化。
>操作 -70℃ 冰箱和液氮罐时应注意防护，如保护性手套和面罩。
离心条件：100g-200g，常温或者 4℃，时间 3-10min。
>转子运行时可能造成细胞机械损伤;
>应提高沉降速率，同时降低损失率;
>应将离心过程标准化，利于提高实验的可重复性
>细胞收集过程应严格控制可能产生的污染
Eppendorf 离心机优势
>10档加减速功能设置适用于细胞精细离心，防止重悬及机械损伤
>转子失衡自动识别功能，确保最佳的离心安全性，进一步减少细胞机械损伤
>整个离心过程的温度精确性，减少温度变化对细胞的伤害
>At set "RPM"定速计时功能，可在达到预设转速时才开始计时，确保离心操作的充分性和可重复性
>气密性吊篮盖及其可单手提起的人性化设计可以实现细胞收集全程无污染
Eppendorf 推荐离心机
Eppendorf 超低温冰箱优势
>101 L至740 L多款立式/卧式超低温冰箱可满足用户不同规模样品低温存储需求
>采用烃类制冷剂取代传统的氟化烃(HFC)，绿色环保，制冷效率更强，节能更省电
>柜体采用先进绝热材料，内外门配置高级密封圈，提高绝热效果，保护样品安全
>高效节能复叠式制冷系统，从环境温度降至－80℃C仅需4小时左右，与其他同类产品相比节约能耗达25％－50％
>先进触摸屏控制面板，实时记录数据及事件项并可由USB端口导出。用户权限分级功能确保更高的样品安全性
Eppendorf推荐超低温冰箱
CryoCube F101h超低温冰箱
您是否正在寻找一款可以放置在个人实验台下的超低温冰箱？
细胞培养室空间狭小，普通的超低温冰箱无法放置其中，日常携带样品往返于培养室与冻存室非常不便并可能带来污染风险，Eppendorf CryoCube F101h可帮您解决当日小规模细胞超低温冻存的需求，或者提供您存放个人珍贵样品的独立空间。只需实验台下半平米的面积就可储存多达 6,000份样品。 另外 CryoCube F101h 可以堆叠放置。 温控范围：-50 ℃C 至 -86 ℃C。为细胞及其他低温存储样品，提供安全可靠的全面保护。
CryoCube F740hi超低温冰箱
Eppendorf -86℃超低温冰箱以高能效、可靠性、无故障等特性为人所知。新一代超低温冰箱CryoCube® F740hi，740L超大容积可存放多达576个"2"冻存盒，采用高效制冷系统和真空绝热板技术，从室温降至-80℃仅需250分钟，24小时耗电量仅10.5kWh，为大规模细胞存储需求提供稳定的超低温冻存环境。F740hi 配置先进触摸屏和VisioNize控制系统，实时在线记录数据及事件项目，可由USB端口导出所有数据。支持用户权限分级设定，激活电子门锁系统，可建立文档以满足细胞实验室规范化样品安全管理需求。
