在这个过程中，细胞状态较为敏感，应尽量减少细胞的应激因素。
对细胞悬液进行离心：是为了增加细胞浓度或洗除有关试剂（如DMSO），离心力达到80-100 x g即可，可调速度非常重要，离心力过高会造成细胞受损。
用移液器移取培养液或者细胞悬液：以更好控制加样速度、准确度和重复性。如果只是短时间的细胞培养，污染问题或许不会很明显，但是大多时候我们在细胞培养的前期，目的是为了稳定的长期的培养传代，必须要考虑防止微生物污染和交叉污染。
详细工作流程
材料和设备
水浴锅，离心机，移液器，无菌吸头/移液管，培养液，Hanks 液，固废/液废桶，细胞培养瓶/皿
操作步骤
1.佩戴眼镜和手套，从液氮罐中取出安瓿或冷冻管。
2.迅速放入 37℃ 水浴中，并不时摇动，确保在1分钟内使其完全融化。
3.将细胞悬液加入预热的 5-10ml 细胞培养液中，轻轻混匀，稀释冻存液可能对细胞造成的影响。
4.在 80-150 x g 离心力条件下离心 2-3 分钟，弃去上层液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，置 37℃ 温箱静置培养（对于悬浮培养细胞应置于摇床上进行悬浮培养）。次日更换一次培养液（悬浮培养细胞不适用），继续培养并观察生长情况。
备注：也可不进行离心直接将细胞加入培养瓶中，并加入培养基贴壁培养 12～24 小时后，充去上清，换入新鲜培养基继续培养（注意：对于贴壁细胞来说，残留的冻存液有可能影响细胞贴壁或对细胞造成伤害，对悬浮细胞来说，将造成细胞活率低，无法满足传代条件的影响）
细胞复苏的注意事项
1.取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。
2.融化冻存细胞速度要快。从液氮拿出来，以最快速度放入37℃水浴，摇动冷冻管，使之尽快通过最易受损的温度段 (-5～0℃) 。待细胞液刚刚融化完取出，加培养液稀释。这样可以避免复苏过程中细胞液中有冰晶的出现，冰晶会破坏细胞膜及细胞内部结构的。
3.去除冻存液。DMSO 在 4 ℃以下对细胞无毒，4 ℃以上有毒；复苏时必须尽快除去。
4.离心不当也会对刚复苏的状态欠佳的细胞产生损伤。用Hanks 液或者预热的培养基洗 1-2 遍后移入培养瓶中培养更有利于细胞生长。
5.加样移液是细胞培养中最常见的操作，移液过程可能增加污染的因素，需要使用无菌吸头，并定期对移液器进行整支消毒。
复苏阶段离心过程关键因素
离心条件：80g-300g ，常温或者 37℃ ，时间 3min 左右。
> 转子运行时可能造成细胞机械损伤;
> 应提高沉降速率，同时降低损失率;
> 温度敏感型细胞需要温控精准，减少细胞温度应激
> 应将离心过程标准化，利于提高实验的可重复性
Eppendorf 离心机优势
> SOFT 软刹车功能适用于细胞梯度离心，防止重悬
> 转子失衡自动识别功能，确保最佳的离心安全性，减少细胞机械损伤
> 使用固定转子时，45℃ 角离心更有利于样品沉降，沉降速度快
> 主动加热功能可确保在整个离心过程的温度精确性，减少温度变化对细胞的伤害
> At set "RPM" 定速计时功能，可在达到预设转速时才开始计时，确保离心操作的充分性和可重复性
Eppendorf 推荐离心机
5430/5430 R 台式高速离心机适配转子
5430 和 5430 R 台式高速离心机，体积小巧、高度适中，适配 12 款不同转子，可满足广泛的离心应用。其中有微量离心管和 PCR 排管转子，另外还具备微孔板水平转子、15 mL/50 mL 锥形离心管和采血管转子，其离心功能绝不逊色任何一台大型台式离心机。
F-35-6-30 固定角转
>最大相对离心力：7,745×g（7,830rpm）
>适用于 6×15/50mL 锥形管或 12×Vacutainer管的转子
F-45-18-17-Cryo 18 孔冻存管转子
（需适配器，最大相对离心力 8,324×g ，最大转速 8,900 rpm）
5702RH 台式低速离心机。对于温度十分敏感的细胞，选择5702RH 温控型离心机，主动加热功能可确保在整个离心过程的温度精确性。
A-4-38 水平转子，含圆形吊篮
> 最大相对离心力: 3,000 x g (4,400 rpm)
> 用于离心采血管或 15/50 mL 锥形管的标准转子
> 圆形吊篮，适用于 1.5-100mL 离心管的离心
> 多种类型适配器可选，用于所有采血管和细胞培养瓶的离心
>气密性转子盖，可以安全离心任何使用的危险样品
气密性由 Public Health England，Porton Down，UK 检测并认证
FA-45-48-11 气密性固定角转
> 最大相对离心力: 18,210 x g (12,700 rpm)
> 最大容量：48 x 1.5/2.0 mL 离心管
> 气密性，离心危险样品更安全
> Eppendorf QuickLock 快速锁定转子盖
移液过程关键因素
> 加样移液是细胞培养中最常见的操作，移液体积一般1ml-10ml。
> 移液器腔体内部无法像生物安全柜桌面或者细胞培养瓶表面一样喷洒消毒，应使用无菌的吸头/移液管并防止枪体前端伸入容器内部。
> 同时，如果移液过程中速度过快，导致液体进入移液器腔体，务必要对移液器进行消毒。
> 移液吸头一定要无菌，同时能够防止液体反吸，防止污染移液器腔体，同时也能够防止交叉污染。
Eppendorf 移液器优势
> 移液、放液、脱卸吸头一键操作，减少气溶胶污染
> 表面特氟龙材质，光滑无死角，易于清洁、消毒，特别适合无菌操作
> 可整支高温高压灭菌，杜绝腔体内污染来源。
Eppendorf双滤芯吸头优势
> 双层滤芯，有效隔绝水滴、溅射和气溶胶，防止污染和生物大分子
> 限定的空气通过率确保样品的回收率和便捷地快速移液操作
> 对颗粒的阻隔能力比其他普通滤芯高出 55-677 倍。
