在细胞培养过程中，除了细胞本身的生长特性，环境也会影响细胞的状态。1：细胞生长的附着物或支持物性质（如：细胞培养瓶/板或细胞培养载体）；2：细胞培养基的理化性质和成分；3：气相成分；4：培养温度等。合适的培养环境才可以使细胞表现出特定的功能。
无论是原代培养还是细胞系的传代培养，都要定期更换培养基。而传代培养过程中，细胞通常遵循一种标准的方式生长：接种后经过一段潜伏期进入指数生长期，即对数期，在这一阶段细胞的生长状态最好。此后细胞密度将逐渐增加到铺满整个细胞培养板/皿/瓶有效基质，当细胞浓度超出培养基的能力时，细胞生长速度将大大减慢，这时可以选择更换培养液或进行分瓶培养，也就是传代。悬浮细胞培养由于机械力保持细胞在悬浮状态，培养和传代过程也不需要胰蛋白酶消化，但是无论哪种情况，都有相似的生长周期。
单层细胞传代示意图（动物细胞培养——基本技术指南（第五版））
材料和设备：
细胞培养箱，细胞培养瓶/板/皿，移液器，无菌移液管，胰蛋白酶，细胞培养液
操作步骤（贴壁细胞）：
1.当复苏的细胞长至彼此汇合时或者培养基耗尽时，可以准备进行细胞传代
2.将细胞瓶经 70% 酒精擦拭后置于无菌工作区，弃去旧的培养基。
3.加入 PBS 或者预热的培养基清洗细胞，去除预洗液。
4.向培养瓶中加入胰蛋白酶（0.1mL/cm2），翻转培养瓶使其均匀覆盖细胞层。
5.静置与培养箱 15-30s（观察细胞是否脱落，如未脱落，可继续混匀后静置）
6.单层细胞大部分脱落后，使用适量培养基终止胰蛋白酶消化，取出适量细胞悬液进行细胞计数。
7.计算细胞接种数量，移出多余细胞悬液，加入培养基，反复吹打细胞悬液直至细胞处于单细胞悬浮状态。
8.分装不同培养瓶，盖上培养瓶，放回细胞培养箱
9.静置 2 小时候观察细胞贴壁状态（悬浮细胞不适用），并在每天固定时间观察、记录细胞生长情况。
悬浮细胞培养一般不换液，根据细胞浓度、Ph 值等传代标准判定传代时间，通过稀释弃掉多余细胞悬液，将剩余细胞悬液稀释到合适的接种密度，参见步骤 7-9。
培养条件：37℃，CO₂ 浓度 5%，（可因具体培养细胞而调整）
细胞换液操作多，应注意全程无菌环境下进行。
操作过程中，生物安全柜内放置物品较多，应分区进行物品放置。
细胞培养环境应均一稳定。同时避免细胞培养瓶反复进出，影响细胞贴壁。
应对培养细胞进行详细信息记录，避免错拿造成交叉污染。
悬浮细胞培养应对培养转速进行优化，以选择最适培养转速。
应详细记录传代时间、代次、接种密度等信息以便确定细胞生长周期及传代等重要信息。
根据实验室情况选择是否使用抗生素，理想情况下应通过污染控制实现无抗生素培养。
实验条件应标准化，以获得稳定的细胞表现。
Eppendorf 细胞培养箱优势
>无风扇设计，提升内部可用容积达25%，日常清洁快速便捷
>六面直接加热，优化开门后温度和CO₂%恢复时间，≤5分钟，不发生过冲情况
>标配140℃/180℃高温消毒功能，全面保护您的珍贵细胞免受污染风险
>可现场升级选配功能，如O2%控制等，灵活拓展您的应用
>内置VisioNize系统，直观的触屏操作，培养过程数据和事件实时记录
Eppendorf推荐CO₂培养箱
Eppendorf CellXpert C170i CO₂培养箱
Eppendorf全新 CellXpert® C170i CO₂ 培养箱采用无风扇式六面直接加热的培养体系，为细胞培养提供稳定均一，无污染的环境条件，适用敏感型细胞培养，如胚胎干细胞、间充质干细胞、类器官3D培养等应用。
New Brunswick S41i CO₂ 恒温摇床
New Brunswick S41i结合先进的 CO₂培养箱和摇床技术，其独创的六面直接加热设计，在箱体内提供温和的热对流循环，从而实现出色的温度和CO₂浓度控制；配置坚固耐用New Brunswick三偏心驱动，提供稳定、均一以及无震动的运行条件，为哺乳动物、昆虫、人类细胞及干细胞提供稳定的悬浮培养环境。
确定每种细胞的生长周期，从而确定传代的接种密度、传代时间，以获得最佳稳定的生长细胞。
细胞分装到 24 孔板，96 孔板等培养容器中进行下一步实验时，应保证每个孔内细胞数量一致。
避免分装细胞时反复多次移液造成样品污染。
Eppendorf 分液器优势
>仅需一次吸液就能进行多达100次的分液操作
>自动识别分液管，无需计算体积，避免分液体积出错
>人体工程学单按钮脱卸分液管，可单手操作，无接触
>1uL-50mL分液范围，体积增量最低为100纳升
>外置活塞式系统：不受液体属性和大部分移液误差影响，有效防止气溶胶污染
Eppendorf 推荐分液器:
Multipette M4手动连续分液器
仅需一次吸液就能进行多达 100 次的分液操作
连续移液非常轻松！Eppendorf Multipette M4手动连续分液器适用于冗长连续分液。即使对于普通移液器难以移取的液体，Multipette/Combitips® 也能轻松移取。通过外置活塞原理来实现分液。其移液无需空气柱，保证了移液的准确性，不会受到所处理液体的密度、黏度和挥发性的影响。
Multipette E3/E3x电动分液器
长时间连续分液和应对高要求液体的专家
分液准确度和精确度丝毫不受影响！ 电动 Multipette E3/E3x 可节省资金与时间，工作无劳损，结果值得信赖。 是工作板和大批离心管的理想、智能的解决方案。 Multipette E3 重量轻、操作用力小，从而减少重复性劳损风险。 与 Multipette/Combitips® 完美适配，自动识别吸头，易于使用。 注射器状的 Combitips tip 分液管极大地提高了移液准确度和精确度。 不受液体属性和大部分手动移液误差影响，有效防止气溶胶污染。
：转移细胞时，没有让细胞液重悬浮，细胞快速沉降，最终接种细胞数量会不一致。
：在细胞转移时，吹打细胞液使其均匀重悬，确保接种细胞数量一致，但要避免过度吹打，以免产生剪切力。
了解正确移液操作对于细胞接种过程中防止细胞重悬的重要性
转移细胞时，因为使用了普通移液器，导致出现气泡问题，细胞附着在气泡上，气泡破裂或者消失，造成细胞无法贴附继续生长，死亡。
：用普通手动移液器加细胞液过程中，由于操作速度过快造成气泡产生，气泡会破坏细胞附着。
：移液需要进行练习，以避免气泡生成，注意消除吸头内的空气。
：使用外置活塞式分液器可以在不产生气泡的情况下转移易气泡液体。
在进行细胞换液操作时，探究最佳的移液技术
：在超净台内杂乱摆放过多的器材，容易阻挡气道，形成湍流，造成层流气流对屏蔽污染物的效果大打折扣。
：工作范围如果过度拥挤，容易在在敞开容器上方移动您的手臂，这样会增加细胞污染风险。
：合理布局管理超净台内的设备和耗材摆放位置，划分不同的工作空间，有序操作，防止造成操作引发的污染情况。
：操作或使用完毕后立即闭合无菌容器。
如何在超净工作台内合理布局您的操作空间，避免污染问题
：培养箱门频繁开启关闭，箱内的细胞培养环境无法及时恢复，细胞生长受到干扰。
：合用的培养箱内样品放置随意，开门后需耗费时间寻找自己的样品，干扰箱内培养环境，还会造成混淆样品的风险。
：避免培养箱频繁开门，了解培养箱开门后参数恢复的速度，规划好样品摆放的位置并正确标记，做到培养箱门快开快关。
：合用的培养箱建议配置内分门，可减少开门后箱内环境的干扰，并妥善管理培养的样品，避免混淆和交叉污染的风险。
实验室中的 CO₂ 培养箱往往多人合用，规范管理使用可优化培养结果
：往培养箱中补水，如果只是直接往承液盘中倒入蒸馏水，污染物依旧会残留在盘内，让承液盘成为污染源。
：定期（每周1-2次）将承液盘整体移出，将残留的水清空，用70%的酒精或异丙醇容易擦拭消毒，待干燥后添加无菌蒸馏水，再放回培养箱内。
：不拆除培养箱内的搁板、搁架及水盘，直接用喷瓶对腔体内喷洒酒精，然后用布擦拭。
：拆除培养箱的搁板、搁架及水盘，将酒精喷洒于布上，再进行腔体的清洁，培养箱内尽量避免死角的存在，擦拭腔体内每个位置，再将移除的配件擦拭清洁后，安装到位。有条件的可过夜运行高温消毒程序。
注意 CO₂ 培养箱承液盘日常换水操作，通过运行高温消毒程序，可有效避免污染发生